Plásmido Doble Nickase (m) Nur77: sc-420884-NIC

El gen murino **Nr4a1** codifica el receptor nuclear huérfano **Nur77 (NR4A1)**, un factor de transcripción de respuesta inmediata que integra señales provenientes de la activación del receptor de células T, las cascadas de MAPK y programas inflamatorios vinculados a NF-κB. Nur77 regula redes génicas que controlan la selección negativa de timocitos, la anergia de células T periféricas, la polarización de macrófagos y la adaptación metabólica, con efectos dependientes del contexto sobre la apoptosis y las vías mitocondriales. En el sistema nervioso se induce rápidamente por la actividad neuronal y las hormonas del estrés, conectando la señalización dependiente de calcio con respuestas transcripcionales. La desregulación de la señalización de NR4A1 se ha implicado en modelos de autoinmunidad e inflamación crónica, aterosclerosis, programas de supervivencia de células cancerosas y procesos neuroinflamatorios y neurodegenerativos.

Nur77 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Nr4a1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Nr4a1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Nr4a1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Nr4a1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.