Nur77 CRISPR Activation Plasmid (m): sc-420884-ACT

Nr4a1 kodiert den verwaisten nukleären Rezeptor Nur77 (NR4A1), einen Immediate-Early-Transkriptionsfaktor, der durch unterschiedliche Stimuli – darunter Antigenrezeptor-Signale, Zytokine und zellulären Stress – rasch induziert wird. Nur77 moduliert Gennetzwerke, die die Aktivierung und Toleranz von T‑Zellen, entzündliche Programme in Makrophagen, metabolische Anpassung und Apoptose steuern, und integriert dabei Signale aus MAPK-, NF‑κB- und calciumabhängigen Signalwegen. In Mausmodellen wurde eine veränderte Nr4a1-Aktivität mit einer gestörten immunologischen Homöostase, chronischer Entzündung sowie vaskulären und metabolischen Phänotypen in Verbindung gebracht, weshalb es häufig als zentraler Knoten zur Untersuchung stimulusresponsiver transkriptioneller Kontrolle genutzt wird. Seine kontextabhängigen Rollen bei Entscheidungen über das Zellschicksal stützen zudem mechanistische Studien zu Onkogenese, Gewebeschädigungsreaktionen und mikroenvironmentgetriebener transkriptioneller Plastizität.

Nur77 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Nr4a1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Nur77 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Nr4a1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Nr4a1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Nur77-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Nr4a1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Nur77-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Nur77-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Nr4a1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.