Plásmido CRISPR de Activación (h) Nur77: sc-418320-ACT

NR4A1 codifica el receptor nuclear huérfano Nur77, un factor de transcripción de respuesta inmediata que acopla rápidamente las señales extracelulares a programas de expresión génica que controlan el destino celular. Nur77 integra la señalización aguas abajo de las vías MAPK, PI3K/AKT y dependientes de calcio para regular la apoptosis, la proliferación y la adaptación metabólica, y puede modular redes transcripcionales inflamatorias mediante la interacción cruzada con NF-κB y AP-1. En las células inmunitarias, Nur77 es un regulador clave de la activación impulsada por el receptor de células T, la tolerancia y la diferenciación, e influye en programas de citocinas y respuestas al estrés. La expresión o actividad desregulada de NR4A1 se ha asociado con afecciones inflamatorias y con la biología del cáncer, lo que respalda su uso como nodo mecanístico para investigaciones centradas en vías de señalización.

Nur77 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de NR4A1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Nur77 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus NR4A1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional NR4A1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Nur77. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo NR4A1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Nur77 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Nur77 en células tumorales con expresión de NR4A1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.