Nup88 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404091-ACT

NUP88 kodiert Nup88, einen zentralen Bestandteil des Kernporenkomplexes, der zum nukleozytoplasmatischen Transport beiträgt, indem er die zytoplasmatische Seite der Pore organisiert und den regulierten Transport von Proteinen und RNAs unterstützt. Durch Wechselwirkungen mit anderen Nukleoporinen und Transportrezeptoren trägt Nup88 dazu bei, die Permeabilität der Kernhülle aufrechtzuerhalten, und beeinflusst die Progression des Zellzyklus, Stressantworten sowie die signalabhängige Genregulation. Eine veränderte NUP88-Expression oder -Lokalisation wurde mit gestörter Transportdynamik und einer fehlerhaften Kontrolle von Proliferations- und Differenzierungsprogrammen in Verbindung gebracht. Diese Eigenschaften machen NUP88 zu einem relevanten Ziel für mechanistische Studien von Kerntransportwegen und deren Verknüpfungen mit der Genomregulation in menschlichen Zellen.

Nup88 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen NUP88-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Nup88 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des NUP88-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der NUP88-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Nup88-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native NUP88-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Nup88-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Nup88-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem NUP88-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.