Plasmide CRISPR/Cas9 KO nucleobindin (h): sc-405167

Présentation

NUCB1 code la nucléobindine, une protéine liant le calcium localisée dans la voie sécrétoire, qui participe à la régulation Ca2+-dépendante du trafic intracellulaire et du tri des protéines. Via ses motifs EF-hand et ses interactions avec le cargo luminal, NUCB1 a été associée à l’homéostasie de l’appareil de Golgi et du réticulum endoplasmique (RE), au transport médié par des vésicules et à des réponses sécrétoires adaptatives au stress. Des altérations de l’expression de NUCB1 ont été rapportées dans divers contextes impliquant une protéostase dérégulée et une signalisation du stress cellulaire, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques de la sécrétion, de la dynamique membranaire et des voies régulées par le Ca2+. Les processus dépendants de NUCB1 sont également étudiés dans des modèles de maladies où la sécrétion, l’agrégation ou les réponses au stress des organites contribuent à la physiopathologie.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO nucleobindin (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène NUCB1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du NUCB1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert NUCB1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine nucleobindin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en NUCB1 pour l'étude de la signalisation de nucleobindin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de NUCB1 essentiels à la fonction de nucleobindin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de NUCB1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le nucleobindin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le nucleobindin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus NUCB1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le nucleobindin plasmide HDR (h) et le nucleobindin (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie NUCB1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles NUCB1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.