Plasmide CRISPR d'Activation (m) nucleobindin 2: sc-424686-ACT

Le gène murin **Nucb2** code la nucléobindine 2, une protéine liant le Ca2+ contenant des motifs EF-hand, qui se localise dans des compartiments de la voie sécrétoire et participe à la sécrétion régulée ainsi qu’à l’homéostasie cellulaire du Ca2+. La nucléobindine 2 a été associée à la signalisation neuroendocrine via sa transformation en peptides apparentés à la nesfatine‑1, avec des rôles rapportés dans le contrôle de l’appétit et de l’équilibre énergétique, ainsi que dans les réponses liées au stress. Dans les tissus périphériques, les altérations de l’expression de **Nucb2** ont été étudiées dans le contexte de la régulation métabolique, de la signalisation associée à l’inflammation et de l’adaptation cellulaire à l’état nutritionnel. Ces propriétés font de **Nucb2** une cible utile pour analyser, dans des modèles murins, le trafic dépendant du Ca2+, la biologie des granules de sécrétion et le dialogue croisé entre systèmes neuroendocrinien et métabolique.

nucleobindin 2 Le plasmide d'activation CRISPR (m) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de Nucb2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

nucleobindin 2 Le plasmide d'activation CRISPR (m) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus Nucb2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription Nucb2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de nucleobindin 2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus Nucb2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de nucleobindin 2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie nucleobindin 2 dans les cellules tumorales présentant une expression de Nucb2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.