Plásmido CRISPR de Activación (h) NUCKS: sc-413018-ACT

NUCKS1 codifica el sustrato 1 de la caseína quinasa nuclear y de la quinasa dependiente de ciclinas (NUCKS), una proteína asociada a la cromatina y altamente fosforilada, implicada en la regulación de la transcripción, la replicación del ADN y las respuestas al daño del ADN. NUCKS participa en redes de señalización nuclear vinculadas a la progresión del ciclo celular y al mantenimiento del genoma, con conexiones funcionales con la remodelación de la cromatina y vías sensibles al estrés. Se ha informado una expresión alterada de NUCKS1 en múltiples contextos patológicos, incluidos cánceres y fenotipos metabólicos, lo que la convierte en una diana útil para estudiar programas transcripcionales, el control de la proliferación y los mecanismos de estabilidad del genoma en modelos celulares humanos.

NUCKS El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de NUCKS1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

NUCKS El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus NUCKS1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional NUCKS1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de NUCKS. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo NUCKS1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de NUCKS en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía NUCKS en células tumorales con expresión de NUCKS1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.