NUB1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-424677

Übersicht

Nub1 (NEDD8 ultimate buster 1) kodiert NUB1, ein interferoninduzierbares Protein, das an den ubiquitinähnlichen Modifikator NEDD8 bindet und die proteasomenabhängige Beseitigung von mit NEDD8 konjugierten Substraten fördert. Durch die Regulation der Neddylierungsdynamik und des Proteinumsatzes von an Cullin‑RING‑E3‑Ligasen gekoppelten Proteinen beeinflusst NUB1 die Homöostase des Ubiquitin‑Proteasom‑Systems, die Zellzyklusprogression und zelluläre Stressantworten. NUB1 interagiert außerdem mit ubiquitinähnlichen Proteinen wie FAT10 und verknüpft damit angeborene Immun-Signalwege mit dem regulierten Proteinabbau. Eine Fehlregulation dieser Signalwege ist häufig an Störungen der Proteostase und an Phänotypen der inflammatorischen Signalübertragung beteiligt, was Nub1 zu einem nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien in Mausmodellen macht.

Das NUB1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Nub1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Nub1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Nub1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die NUB1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Nub1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der NUB1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Nub1-Exone abzielen, die für die NUB1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Nub1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom NUB1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom NUB1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Nub1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das NUB1 HDR-Plasmid (m) und NUB1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Nub1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Nub1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.