NTR1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402552-ACT

O receptor de neurotensina 1 (NTSR1/NTR1) é um GPCR de classe A que se acopla principalmente a Gq/11 e também pode acionar sinalização dependente de β-arrestina, ligando a ligação da neurotensina à ativação da fosfolipase C, à mobilização de Ca2+ intracelular e à saída da via MAPK/ERK. Por meio dessas cascatas, o NTR1 influencia a neurotransmissão, a secreção endócrina, a contratilidade do músculo liso e a regulação de programas de proliferação e sobrevivência celulares. A expressão e a sinalização de NTSR1 têm sido investigadas em contextos de excitabilidade neuronal alterada, sinalização inflamatória e crosstalk com vias oncogênicas, nos quais a atividade de MAPK e PI3K/AKT impulsionada pelo receptor pode modular transições de estado celular. Essas características tornam o NTSR1 um nó útil para estudar programas transcricionais mediados por GPCRs, dessensibilização/internalização do receptor e reconfiguração de vias em modelos relevantes para doenças.

NTR1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NTSR1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

NTR1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NTSR1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NTSR1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de NTR1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NTSR1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de NTR1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via NTR1 em células tumorais com expressão de NTSR1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.