Plasmide CRISPR/Cas9 KO NTE (h): sc-406850

Présentation

PNPLA6 code l’estérase cible de la neuropathie (NTE), une phospholipase/lysophospholipase associée aux membranes qui hydrolyse la phosphatidylcholine afin de réguler l’homéostasie des phospholipides. L’activité de NTE contribue à l’intégrité de la membrane du réticulum endoplasmique, à la dynamique des gouttelettes lipidiques et au maintien des neurones en contrôlant les niveaux de lysophospholipides bioactifs. Une perturbation de PNPLA6 altère le remodelage membranaire et les voies de signalisation lipidique, des processus étroitement liés à la stabilité des axones et à la fonction synaptique. Les variations génétiques de PNPLA6 sont associées à des phénotypes neurodégénératifs et neurodéveloppementaux, ce qui en fait un locus utile pour étudier les mécanismes de vulnérabilité neuronale liés aux lipides.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO NTE (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène PNPLA6 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du PNPLA6, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert PNPLA6 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine NTE.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en PNPLA6 pour l'étude de la signalisation de NTE, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de PNPLA6 essentiels à la fonction de NTE
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de PNPLA6 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le NTE plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le NTE plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus PNPLA6. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le NTE plasmide HDR (h) et le NTE (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie PNPLA6 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles PNPLA6 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.