NT-3 Lentiviral Activation Particles (h): sc-401458-LAC

Neurotrophin 3 (NTF3) kodiert NT-3, einen sezernierten neurotrophen Faktor, der für das neuronale Überleben, die Differenzierung und die synaptische Reifung während der Entwicklung sowie für die Aufrechterhaltung von adultem Gewebe essenziell ist. NT-3 signalisiert hauptsächlich über die Rezeptor-Tyrosinkinase TRKC/NTRK3 und aktiviert dabei MAPK/ERK-, PI3K–AKT- und PLCγ-Kaskaden, um Neuritenauswachsen, Neurotransmission und aktivitätsabhängige Plastizität zu regulieren. Über das Nervensystem hinaus beeinflusst NT-3 Interaktionen zwischen sensorischen Neuronen und ihren Zielgeweben und kann über Signalnetzwerke der Neurotrophinrezeptoren auch Glia- und periphere Gewebereaktionen modulieren. Eine fehlregulierte Aktivität des NTF3/NT-3-Signalwegs wird mit neuroentwicklungsbedingten und neurodegenerativen Phänotypen in Verbindung gebracht und wird häufig im Kontext von NTRK-vermittelten Signalveränderungen untersucht, die für Erkrankungen des Nervensystems relevant sind.

NT-3 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente NTF3-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

NT-3 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der NTF3-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen NT-3-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen NTF3-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.