Plásmido CRISPR de Activación (h) NT-3: sc-401458-ACT

La neurotrofina 3 (NTF3) codifica la neurotrofina secretada NT-3, un regulador clave de la supervivencia neuronal, el crecimiento de neuritas y la maduración sináptica durante el desarrollo y en el mantenimiento del tejido adulto. NT-3 señaliza principalmente a través de NTRK3/TrkC para activar las vías MAPK/ERK, PI3K–AKT y PLCγ, integrando el soporte trófico con la plasticidad dependiente de la actividad y programas de diferenciación. Más allá del sistema nervioso, la señalización dependiente de NTF3 influye en la guía axonal, la función de las neuronas sensoriales y las interacciones neuroinmunes mediante la modulación de la expresión génica y la dinámica del citoesqueleto. La señalización neurotrófica desregulada, incluida la actividad alterada del eje NT-3/TrkC, se ha vinculado a fenotipos del neurodesarrollo y a mecanismos relevantes para la neurodegeneración y la biología del dolor neuropático.

NT-3 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de NTF3 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

NT-3 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus NTF3 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional NTF3, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de NT-3. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo NTF3 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de NT-3 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía NT-3 en células tumorales con expresión de NTF3 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.