NSP3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407380

Descripción general

SH2D3C codifica NSP3, una proteína adaptadora citosólica que contiene dominios SH2 y SH3 y que ayuda a acoplar receptores fosforilados en tirosina con complejos de señalización aguas abajo. NSP3 participa en vías que regulan la remodelación del citoesqueleto, la adhesión dependiente de integrinas y la transducción de señales mediada por receptores, influyendo en la migración celular y en comportamientos celulares relacionados con la respuesta inmunitaria. Mediante interacciones con quinasas y proteínas de andamiaje, puede modular MAPK y otras redes impulsadas por fosfotirosinas que determinan los umbrales de activación y los programas de motilidad celular. La señalización adaptadora desregulada y los fenotipos alterados de adhesión/migración se asocian con frecuencia a la biología inflamatoria y a procesos relacionados con el cáncer, lo que convierte a SH2D3C en una diana útil para estudios mecanísticos de los circuitos de señalización.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO NSP3 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen SH2D3C en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del SH2D3C junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de SH2D3C tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína NSP3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en SH2D3C para la investigación de la señalización de NSP3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de SH2D3C críticos para la función de NSP3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de SH2D3C para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido NSP3 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido NSP3 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus SH2D3C. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR NSP3 (h) y el plásmido HDR NSP3 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología SH2D3C para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana SH2D3C definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.