NRSF Lentiviral Activation Particles (h): sc-418578-LAC

Der RE1-Silencing-Transkriptionsfaktor (REST), auch als neuron-restrictive silencer factor (NRSF) bekannt, ist ein sequenzspezifischer transkriptioneller Repressor, der an RE1/NRSE-Elemente bindet, um neuronale Genprogramme in nicht-neuronalen Zellen zu unterdrücken und die neuronale Reifung sowie Plastizität zu formen. REST koordiniert Chromatin-Remodeling, indem es Korepressor-Komplexe wie CoREST, HDACs und Histon-Methyltransferasen rekrutiert und dadurch den epigenetischen Zustand, synaptische Signalübertragung und aktivitätsabhängige Transkriptionsnetzwerke beeinflusst. Über diese Funktionen integriert REST Entwicklungssignale und Stressantworten, die Zellschicksalsentscheidungen, Erregbarkeit und Differenzierungsverläufe beeinflussen. Eine fehlregulierte REST/NRSF-Aktivität wurde mit neuroentwicklungsbedingten und neurodegenerativen Prozessen sowie mit onkogener transkriptioneller Umprogrammierung in Verbindung gebracht und macht REST zu einem zentralen Knotenpunkt für mechanistische Studien der Genregulation.

NRSF Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente REST-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

NRSF Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der REST-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen NRSF-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen REST-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.