Plásmido Doble Nickase (h) NRSF: sc-418578-NIC

REST, también conocido como factor silenciador restrictivo de neuronas (NRSF), es un represor transcripcional con dedos de zinc que se une a sitios del elemento represor-1 (RE1/NRSE) para silenciar programas génicos neuronales en células no neuronales y modular la maduración neuronal. Mediante el reclutamiento de complejos correpresores como SIN3/HDAC y CoREST/LSD1, REST remodela la cromatina para regular genes sinápticos, canales iónicos y vías neurosecretoras, influyendo en la diferenciación, la excitabilidad y las respuestas al estrés. El control transcripcional dependiente de REST se interseca con la regulación epigenética y la señalización dependiente de la actividad, contribuyendo a cambios específicos del contexto en la identidad celular y la plasticidad. La actividad desregulada de REST/NRSF se ha asociado con mecanismos del neurodesarrollo y la neurodegeneración, así como con programas aberrantes de represión transcripcional observados en múltiples contextos tumorales, lo que respalda su uso como un nodo para estudiar redes de regulación génica.

NRSF El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus REST en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de REST. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de REST. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con REST alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.