Nrf3 Double Nickase Plasmid (h): sc-404543-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Nrf3 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Nrf3 Double-Nickase-Plasmid (h) und Nrf3 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf NFE2L3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Nrf3 Double Nickase Plasmid (h) | sc-404543-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Nrf3 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404543-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
NFE2L3 kodiert den Cap’n’Collar-bZIP-Transkriptionsfaktor Nrf3, einen Regulator redoxresponsiver Genexpression und von Proteostase-Programmen. Nrf3 ist an der Signalgebung bei oxidativem Stress beteiligt und ist mit ER-assoziierten Prozessen verknüpft, darunter die transkriptionelle Kontrolle von Proteasom-Untereinheiten, die den Proteinumsatz und die zelluläre Anpassung mitbestimmen. In humanen Zellen wurde eine dysregulierte Nrf3-Aktivität mit veränderter Proliferation, Differenzierung und Stresstoleranz in Verbindung gebracht, was sie für Studien zur Tumorbiologie und zu inflammatorischen Mikroumgebungen relevant macht. Seine Pfadvernetzung mit antioxidativen Antwortnetzwerken und der Ubiquitin-Proteasom-Funktion unterstützt mechanistische Untersuchungen dazu, wie Zellen unter metabolischem und genotoxischem Stress die Homöostase aufrechterhalten.
Nrf3 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des NFE2L3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von NFE2L3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die NFE2L3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit NFE2L3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.