Plásmido Doble Nickase (m) Nrf2: sc-421869-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)Nrf2 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Nrf2 (m) y el plásmido de doble nickasa Nrf2 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Nfe2l2. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) Nrf2 | sc-421869-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) Nrf2 | sc-421869-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen Nfe2l2 del ratón codifica Nrf2, un factor de transcripción bZIP que coordina la defensa celular frente al estrés electrofílico y oxidativo al unirse a elementos de respuesta antioxidante (ARE) e inducir genes de desintoxicación, control redox y proteostasis. En condiciones basales, la actividad de Nrf2 se mantiene restringida mediante ubiquitinación dependiente de KEAP1 y recambio por el proteasoma, mientras que las señales de estrés estabilizan Nrf2 para remodelar programas transcripcionales relacionados con el metabolismo del glutatión, la regeneración de NADPH y las vías de eliminación de xenobióticos. La señalización de Nrf2 se entrecruza con redes inflamatorias y metabólicas, incluido el diálogo con NF-κB y la homeostasis mitocondrial, moldeando respuestas adaptativas a estresores ambientales y endógenos. La desregulación del eje KEAP1–Nrf2 se ha implicado en modelos de carcinogénesis, estados inflamatorios crónicos, neurodegeneración y disfunción metabólica, lo que convierte a Nfe2l2 en una diana frecuente para estudios mecanísticos sobre resiliencia al estrés y biología redox.
Nrf2 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Nfe2l2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Nfe2l2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Nfe2l2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Nfe2l2 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.