NRAMP 2 Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (h): sc-418176-LAC

SLC11A2 codifica a NRAMP2 (DMT1), um transportador de íons metálicos divalentes acoplado a prótons, que medeia a captação celular e a exportação endossomal de ferro ferroso e de outros metais de transição. A NRAMP2 é central para a absorção intestinal de ferro e para a liberação de ferro do ciclo da transferrina nos endossomos, ligando-a à endocitose, à acidificação vesicular e às vias de homeostase de metais que influenciam o metabolismo mitocondrial e as respostas ao estresse oxidativo. A desregulação de SLC11A2 está associada a uma anemia microcítica hereditária com sobrecarga de ferro e contribui para fenótipos de manejo de ferro relevantes para neurodegeneração, inflamação e estresse metabólico. Como transportador de membrana com regulação dependente do contexto, a NRAMP2 é frequentemente estudada em modelos de detecção de nutrientes, biologia redox e interações hospedeiro–patógeno, em que a disponibilidade de metais molda a função celular.

As Partículas de Ativação Lentivirais NRAMP 2 (h) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de SLC11A2 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais NRAMP 2 (h) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição SLC11A2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de NRAMP 2. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo SLC11A2 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.