Plásmido Doble Nickase (h) NR5A2: sc-402656-NIC

NR5A2 (miembro 2 del grupo A de la subfamilia 5 de receptores nucleares; LRH-1) es un factor de transcripción receptor nuclear huérfano que se une a elementos de respuesta hormonal para regular programas génicos que controlan la homeostasis del colesterol y los ácidos biliares, la esteroidogénesis y el metabolismo de los lípidos. En contextos epiteliales, NR5A2 también favorece estados de proliferación y diferenciación al integrar señales de la vía de los receptores nucleares con redes transcripcionales metabólicas y del desarrollo. Su actividad se cruza con vías que regulan la función pancreática y hepática, y cambios en la expresión de NR5A2 o variantes reguladoras se han vinculado con fenotipos relevantes para enfermedad, incluida la inflamación y la reprogramación transcripcional asociada al cáncer. Como regulador asociado al linaje celular y al metabolismo, NR5A2 se estudia con frecuencia en modelos de biología gastrointestinal, hepática y pancreática, así como en análisis de circuitería transcripcional.

NR5A2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus NR5A2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de NR5A2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de NR5A2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con NR5A2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.