Plasmide CRISPR d'Activation (h) NR3A: sc-403378-ACT

GRIN3A code pour la sous-unité NR3A des récepteurs N‑méthyl‑D‑aspartate (NMDA), une famille de récepteurs ionotropes du glutamate qui régule la neurotransmission excitatrice perméable au calcium et la plasticité synaptique. L’incorporation de NR3A dans les assemblages récepteurs module les propriétés du canal, influençant l’excitabilité neuronale, la signalisation dépendante de l’activité et la maturation des circuits. Par ses effets sur la transmission glutamatergique, NR3A contribue à des voies qui gouvernent le neurodéveloppement, le remodelage des synapses et la plasticité dépendante de l’expérience. Une expression altérée de GRIN3A ou un déséquilibre des sous-unités des récepteurs NMDA a été associé à des phénotypes neuropsychiatriques et neurodéveloppementaux, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques de la dérégulation de la signalisation excitatrice.

NR3A Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GRIN3A sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

NR3A Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GRIN3A dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GRIN3A, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de NR3A. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GRIN3A natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de NR3A au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie NR3A dans les cellules tumorales présentant une expression de GRIN3A silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.