NPY5-R Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421954

Descripción general

Npy5r codifica el receptor Y5 del neuropéptido Y (NPY5-R), un receptor acoplado a proteína G (GPCR) de tipo Gi/o que se une al neuropéptido Y y a péptidos relacionados para modular los niveles intracelulares de AMPc y la señalización de quinasas aguas abajo. En el sistema nervioso central, NPY5-R contribuye a la regulación de la conducta alimentaria, la homeostasis energética, la respuesta al estrés y las salidas neuroendocrinas mediante la integración de circuitos hipotalámicos y límbicos. La activación del receptor influye en la transmisión sináptica, la excitabilidad neuronal y la plasticidad de las redes neuropeptidérgicas, vinculando a Npy5r con vías que controlan el apetito y la regulación metabólica. La desregulación de la señalización de NPY se ha asociado con fenotipos relacionados con la obesidad y con procesos afectivos y de estrés, lo que convierte a Npy5r en una diana útil para estudios mecanísticos en modelos murinos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO NPY5-R (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Npy5r en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Npy5r junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Npy5r tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína NPY5-R.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Npy5r para la investigación de la señalización de NPY5-R, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Npy5r críticos para la función de NPY5-R
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Npy5r para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido NPY5-R CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido NPY5-R CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Npy5r. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR NPY5-R (m) y el plásmido HDR NPY5-R (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Npy5r para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Npy5r definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.