NPY5-R Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421954

Panoramica

Npy5r codifica il recettore Y5 del neuropeptide Y (NPY5-R), un GPCR accoppiato a Gi/o che lega il neuropeptide Y e peptidi correlati per modulare i livelli intracellulari di cAMP e la segnalazione a valle mediata da chinasi. Nel sistema nervoso centrale, NPY5-R contribuisce alla regolazione del comportamento alimentare, dell’omeostasi energetica, della reattività allo stress e degli output neuroendocrini attraverso l’integrazione di circuiti ipotalamici e limbici. L’attivazione del recettore influenza la trasmissione sinaptica, l’eccitabilità neuronale e la plasticità delle reti neuropeptidergiche, collegando Npy5r a vie che controllano l’appetito e la regolazione metabolica. Una segnalazione NPY disregolata è stata associata a fenotipi legati all’obesità e a processi affettivi e di stress, rendendo Npy5r un bersaglio utile per studi meccanicistici in modelli murini.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO NPY5-R (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Npy5r in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Npy5r insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Npy5r a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina NPY5-R.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Npy5r per lo studio della segnalazione di NPY5-R, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Npy5r critici per la funzione di NPY5-R
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Npy5r per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal NPY5-R CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal NPY5-R CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Npy5r. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal NPY5-R Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR NPY5-R (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Npy5r per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Npy5r definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.