Plásmido CRISPR de Activación (h) NPY2-R: sc-417895-ACT

NPY2R codifica el receptor humano Y2 del neuropéptido Y (NPY2-R), un GPCR acoplado a Gi/o que se une al neuropéptido Y y al péptido YY para modular la señalización de AMPc, la actividad de canales iónicos y la dinámica de la vía MAPK/ERK aguas abajo. NPY2-R participa de forma amplia en la regulación neuroendocrina, modelando la transmisión sináptica, la respuesta al estrés y los circuitos relacionados con el apetito, y también contribuye a la fisiología vascular y gastrointestinal. A través de la neurotransmisión inhibitoria y el control presináptico de la liberación de péptidos, NPY2R influye en la excitabilidad celular y la homeostasis metabólica. La desregulación de la señalización de NPY2R se ha asociado con fenotipos relevantes para el equilibrio energético, las vías del estado de ánimo y del estrés, y procesos inflamatorios o autonómicos, lo que lo convierte en una diana útil para estudios mecanísticos en modelos celulares neuronales y periféricos.

NPY2-R El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de NPY2R sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

NPY2-R El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus NPY2R en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional NPY2R, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de NPY2-R. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo NPY2R y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de NPY2-R en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía NPY2-R en células tumorales con expresión de NPY2R silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.