Npl4 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-403787-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- Npl4O plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase Npl4 (h) e o Plasmídeo Double Nickase Npl4 (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para NPLOC4. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:Npl4 Anticorpo (D-1): sc-365796
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
Npl4 Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-403787-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Npl4 Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-403787-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
NPLOC4 codifica Npl4, um cofator central do complexo AAA+ ATPase p97/VCP, que reconhece substratos poliubiquitinados e acopla a extração dependente de ubiquitina à degradação pelo proteassoma. Por meio do seu papel na degradação associada ao retículo endoplasmático (ERAD), no controle de qualidade associado aos ribossomos e na renovação de proteínas associadas à cromatina, Npl4 ajuda a manter a proteostase durante o estresse celular e dá suporte à estabilidade do genoma. A disrupção do eixo p97–UFD1–Npl4 perturba a sinalização por ubiquitina e pode alterar respostas ao estresse proteotóxico, às demandas de reparo de DNA e à progressão do ciclo celular, tornando o NPLOC4 um ponto útil para estudar redes de controle de qualidade proteica. A regulação aberrante dessa via tem sido associada, em sistemas experimentais, a fenótipos relevantes para neurodegeneração e câncer, por efeitos sobre a homeostase proteica e a sinalização adaptativa ao estresse.
Npl4 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus NPLOC4 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de NPLOC4. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função NPLOC4. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com NPLOC4 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.