Plásmido Doble Nickase (h) Npl4: sc-403787-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Npl4 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Npl4 (h) y el plásmido de doble nickasa Npl4 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a NPLOC4. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Npl4 Anticuerpo (D-1): sc-365796
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Npl4 | sc-403787-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) Npl4 | sc-403787-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
NPLOC4 codifica Npl4, un cofactor central del complejo ATPasa AAA+ p97/VCP que reconoce sustratos poliubiquitinados y acopla la extracción dependiente de ubiquitina con la degradación proteasomal. A través de su función en la degradación asociada al retículo endoplásmico (ERAD), el control de calidad asociado al ribosoma y el recambio de proteínas asociadas a la cromatina, Npl4 ayuda a mantener la proteostasis durante el estrés celular y respalda la estabilidad del genoma. La alteración del eje p97–UFD1–Npl4 perturba la señalización de ubiquitina y puede modificar las respuestas al estrés proteotóxico, las demandas de reparación del ADN y la progresión del ciclo celular, lo que convierte a NPLOC4 en un nodo útil para estudiar redes de control de calidad proteico. La regulación aberrante de esta vía se ha vinculado, en sistemas experimentales, con fenotipos relevantes para la neurodegeneración y el cáncer mediante efectos sobre la homeostasis proteica y la señalización adaptativa al estrés.
Npl4 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus NPLOC4 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de NPLOC4. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de NPLOC4. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con NPLOC4 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.