Plasmide CRISPR d'Activation (h) nov: sc-402642-ACT

Le gène humain **NOV** (*nephroblastoma overexpressed* ; **CCN3**) code la protéine matricellulaire sécrétée nov, membre de la famille **CCN** qui module la communication cellule–matrice et la signalisation des facteurs de croissance. nov influence le remodelage de la matrice extracellulaire, l’adhésion et la migration cellulaires, ainsi que les programmes de différenciation, via des interactions avec les intégrines, les protéoglycanes à héparane sulfate et des voies associées à **TGF-β**, **Wnt/β-caténine** et **Notch**. En façonnant les microenvironnements stromaux et inflammatoires, l’expression de NOV est fréquemment étudiée dans des contextes de fibrose, de réparation tissulaire et de biologie tumorale. Une dérégulation de NOV a été rapportée dans de nombreuses tumeurs malignes et affections du tissu conjonctif, ce qui étaye son intérêt en tant que nœud mécanistique pour des études de voies et de phénotypes dans des cellules humaines.

nov Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de NOV sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

nov Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus NOV dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription NOV, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de nov. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus NOV natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de nov au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie nov dans les cellules tumorales présentant une expression de NOV silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.