Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Notch 4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-421934
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Notch 4 Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im Notch 4-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Notch 4: sc-393893
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Notch 4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) | sc-421934 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
Notch4 kodiert einen einschleifigen Transmembranrezeptor der Notch-Familie, der kontaktabhängige Signalübertragung vermittelt und dadurch Zellschicksalsentscheidungen, Proliferation und Differenzierung steuert. Nach Ligandenbindung durch Delta-like- oder Jagged-Proteine führt eine proteolytische Spaltung des Rezeptors zur Freisetzung der intrazellulären Notch-Domäne, die in Zusammenarbeit mit RBPJ/CSL und Koaktivatoren Transkriptionsprogramme reguliert. In Mausgeweben ist Notch4 eng mit der Gefäß- und Endothelbiologie verknüpft und beeinflusst über Crosstalk mit Signalwegen wie VEGF, Wnt und TGF-β angiogenes Verhalten und Gefäßreifung. Eine fehlregulierte Notch4-Signalgebung wurde mit aberrantem vaskulärem Remodeling und tumorassoziierter Angiogenese in Verbindung gebracht und ist damit relevant für mechanistische Studien zu entwicklungs- und krankheitsassoziierten Signalnetzwerken.
Das Notch 4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Notch4-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Notch4-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Notch4 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Notch 4-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Notch4-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Notch 4-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf Notch4-Exone abzielen, die für die Notch 4-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere Notch4-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom Notch 4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Notch 4 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Notch4-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Notch 4 HDR-Plasmid (m) und Notch 4 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Notch4-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Notch4-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.