Plasmide Double Nickase (m) NOS2/iNOS: sc-421928-NIC

Le gène murin Nos2 code la NO synthase inductible (NOS2/iNOS), une enzyme qui produit de l’oxyde nitrique à partir de la L-arginine lors des réponses inflammatoires et de l’immunité innée. NOS2 est induite transcriptionnellement en aval de voies telles que NF-κB, JAK/STAT et la signalisation des interférons, modulant l’activation des macrophages, la défense antimicrobienne et la régulation redox-dépendante de la signalisation cellulaire. Une activité iNOS prolongée peut entraîner un stress nitrosatif et la S-nitrosylation des protéines, affectant la fonction mitochondriale, les réponses aux dommages de l’ADN et l’apoptose. Une régulation altérée de Nos2 a été impliquée dans des modèles d’infection, d’auto-immunité, de neuroinflammation, de dysfonction cardiovasculaire et d’inflammation associée aux tumeurs, ce qui en fait un nœud clé pour des études mécanistiques des lésions tissulaires médiées par l’immunité.

NOS2/iNOS Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Nos2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Nos2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Nos2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Nos2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.