Plasmide CRISPR/Cas9 KO Norpeg (h): sc-408852

Présentation

RAI14 code Norpeg, une protéine associée au cytosquelette impliquée dans l’organisation de structures riches en actine et dans la régulation de la morphologie, de l’adhérence et de la motilité cellulaires. Norpeg a été reliée à des processus de signalisation qui coordonnent le remodelage du cytosquelette, ce qui étaye son rôle dans la migration cellulaire et les dynamiques épithéliales/mésenchymateuses. Des études d’expression et de fonction ont associé RAI14 à des contextes de contrôle altéré de la croissance cellulaire et de l’architecture tissulaire, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude des phénotypes prolifératifs et invasifs. En tant que facteur de type échafaudage, Norpeg constitue un point d’entrée utile pour analyser comment l’organisation du cytosquelette s’articule avec la signalisation intracellulaire et les programmes de réponse au stress.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Norpeg (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène RAI14 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du RAI14, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert RAI14 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Norpeg.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en RAI14 pour l'étude de la signalisation de Norpeg, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de RAI14 essentiels à la fonction de Norpeg
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de RAI14 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Norpeg plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Norpeg plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus RAI14. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Norpeg plasmide HDR (h) et le Norpeg (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie RAI14 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles RAI14 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.