Noggin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2): sc-402090-KO-2
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Noggin Das CRISPR/Cas9-Knockout (KO)-Plasmid (h2) ist ein Pool von Plasmiden, von denen jedes für die Cas9-Nuklease und eine zielspezifische 20-nt-Guide-RNA (gRNA) kodiert, die für maximale Knockout-Effizienz unter Verwendung von Sequenzen aus der GeCKO v2-Bibliothek entwickelt wurde
- gRNA-Sequenzen lenken Cas9 so, dass es ortsspezifische Doppelstrangbrüche (DSBs) im Noggin-Genomlokus induziert, was zu einem Gen-Knockout durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ) führt
- Die Puromycin-Resistenz- und RFP-Gene werden von LoxP-Stellen flankiert, was die Entfernung der Selektionsmarker mittels Cre-Rekombinase (Cre-Vektor: sc-418923) nach der Etablierung stabiler Knockout-Zelllinien ermöglicht
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Noggin: sc-293439
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Noggin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) | sc-402090-KO-2 | 20 µg | $397.00 |
Übersicht
NOG kodiert Noggin, ein sezerniertes Glykoprotein, das BMP-Liganden (insbesondere BMP2, BMP4 und BMP7) bindet und neutralisiert und dadurch während der Entwicklung sowie bei der Homöostase adulter Gewebe die Signalgradienten der BMP/TGF-β-Superfamilie fein abstimmt. Durch die Antagonisierung der Aktivierung von BMP-Rezeptoren und der nachgeschalteten Phosphorylierung von SMAD1/5/8 beeinflusst Noggin Zellschicksalsentscheidungen, osteogene und chondrogene Differenzierung sowie Musterbildungsprozesse in mesenchymalen und neuronalen Zelllinien. Eine veränderte NOG-Aktivität wird mit einer dysregulierten Skelettmorphogenese und Gelenkbildung in Verbindung gebracht und wird häufig in Kontexten untersucht, in denen eine aberrante, BMP-getriebene Umgestaltung und Differenzierung eine Rolle spielt. Als zentraler extrazellulärer Modulator der Morphogensignalgebung ist Noggin relevant für Studien in der Entwicklungsbiologie, der Knochen- und Knorpelbiologie sowie für die Signalweg‑Wechselwirkungen mit WNT- und FGF-Programmen.
Das Noggin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des NOG-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des NOG-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.
Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von NOG nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Noggin-Proteinexpression aufheben.
Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von NOG-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Noggin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.
Hauptmerkmale
- sgRNAs, die auf NOG-Exone abzielen, die für die Noggin-Funktion entscheidend sind
Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
Pool von Plasmiden, die auf mehrere NOG-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion
Designvarianten
CRISPRs +/- HDRs
- gRNAs, die vom Noggin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Noggin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des NOG-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Noggin HDR-Plasmid (h) und Noggin HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von NOG-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten NOG-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.