Particules Lentivirales d'Activation (h) NNT: sc-402908-LAC

La NNT humaine (nicotinamide nucleotide transhydrogenase) est une enzyme de la membrane interne mitochondriale qui couple la force proton-motrice au transfert d’hydrure entre le NAD(H) et le NADP(H), assurant ainsi le maintien des réserves mitochondriales de NADPH. En soutenant les systèmes antioxydants dépendants du glutathion et de la thiorédoxine, la NNT contribue au maintien de l’homéostasie rédox, limite l’accumulation d’espèces réactives de l’oxygène (ROS) et stabilise la bioénergétique mitochondriale. L’activité de la NNT s’inscrit à l’interface de la phosphorylation oxydative, du métabolisme mitochondrial et de la signalisation des réponses au stress, qui influencent l’apoptose et des processus associés à l’inflammasome. Une dérégulation de la fonction de la NNT a été associée dans la littérature à une altération de l’équilibre rédox mitochondrial et à des phénotypes métaboliques pertinents pour la dysfonction cardiométabolique et la biologie du stress endocrinien, ce qui en fait une cible utile pour des études mécanistiques de la résilience mitochondriale.

Les particules d'activation lentivirales NNT (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de NNT dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales NNT (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription NNT, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de NNT. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif NNT ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.