NMDAε4 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420692

Descripción general

Grin2d codifica la subunidad del receptor NMDA del ratón NMDAε4 (GluN2D), un componente de canal iónico activado por glutamato que modula la transmisión sináptica excitadora mediante una entrada de Ca²⁺ dependiente del voltaje y del ligando. La incorporación de NMDAε4 influye en la cinética del receptor y en su sensibilidad al Mg²⁺, modulando así la plasticidad sináptica, la expresión génica dependiente de la actividad y el desarrollo de las redes neuronales. La señalización del receptor NMDA se interconecta con CaMK/CREB y otras vías dependientes de calcio que acoplan la actividad sináptica a programas transcripcionales y a la maduración de los circuitos. La alteración de la función de NMDAε4 o de la composición de subunidades se estudia con frecuencia en el contexto de fenotipos del neurodesarrollo y neuropsiquiátricos, así como de la susceptibilidad a convulsiones y de paradigmas de estrés excitotóxico.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO NMDAε4 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Grin2d en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Grin2d junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Grin2d tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína NMDAε4.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Grin2d para la investigación de la señalización de NMDAε4, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Grin2d críticos para la función de NMDAε4
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Grin2d para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido NMDAε4 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido NMDAε4 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Grin2d. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR NMDAε4 (m) y el plásmido HDR NMDAε4 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Grin2d para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Grin2d definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.