NMDAε3 Double Nickase Plasmid (h): sc-402942-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das NMDAε3 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- NMDAε3 Double-Nickase-Plasmid (h) und NMDAε3 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf GRIN2C abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
NMDAε3 Double Nickase Plasmid (h) | sc-402942-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
NMDAε3 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402942-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GRIN2C kodiert die NMDA-Rezeptoruntereinheit NMDAε3 (GluN2C), eine Komponente eines glutamatgesteuerten Ionenkanals, die sich mit NR1 und anderen NR2-Untereinheiten zusammenlagert, um die exzitatorische synaptische Übertragung zu regulieren. NMDAε3 trägt zu den biophysikalischen Eigenschaften des Rezeptors bei, die den Kalziumeinstrom, die synaptische Plastizität und die aktivitätsabhängige Genexpression prägen, und verknüpft sie damit mit zentralen neuroentwicklungs- und synaptischen Signalwegen. Durch die Kopplung an nachgeschaltete Ca2+-abhängige Kaskaden wie CaMK- und CREB-assoziierte Transkriptionsprogramme beeinflusst GRIN2C die Reifung neuronaler Netzwerke und die Funktion neuronaler Schaltkreise. Veränderungen in der Zusammensetzung der NMDA-Rezeptoruntereinheiten und eine Dysregulation von GRIN2C wurden im Zusammenhang mit neuropsychiatrischen und neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen untersucht, was seine Relevanz für mechanistische Studien der exzitatorischen Neurotransmission unterstreicht.
NMDAε3 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GRIN2C-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GRIN2C abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GRIN2C-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GRIN2C-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.