NMDAε1 Double Nickase Plasmid (m): sc-420689-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das NMDAε1 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- NMDAε1 Double-Nickase-Plasmid (m) und NMDAε1 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Grin2a abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: NMDAε1: sc-515148
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
NMDAε1 Double Nickase Plasmid (m) | sc-420689-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
NMDAε1 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-420689-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Grin2a kodiert die NMDA-Rezeptoruntereinheit NMDA ε1 (NR2A), eine Komponente eines glutamatgesteuerten Ionenkanals, die die synaptische Übertragung durch aktivitätsabhängigen Ca²⁺-Einstrom mitprägt. NR2A-haltige NMDA-Rezeptoren sind zentral für die exzitatorische Neurotransmission, synaptische Plastizität und die Verfeinerung neuronaler Schaltkreise. Dabei koppeln sie die Rezeptoraktivierung an nachgeschaltete CaMK/CREB-Signalwege, MAPK/ERK-Pfade sowie Transkriptionsprogramme, die Lernen und Gedächtnis regulieren. Im Mausgehirn trägt GRIN2A zur Feinabstimmung der Rezeptorkinetik und zur synaptischen Reifung bei und beeinflusst damit das Gleichgewicht zwischen Erregung und Hemmung. Eine fehlregulierte GRIN2A-/NMDA-Rezeptor-Signalgebung wurde in experimentellen Modellen mit neuroentwicklungsbezogenen und anfallsassoziierten Phänotypen in Verbindung gebracht, was ihren Einsatz in mechanistischen Studien zu Kognition und Netzwerkerregbarkeit unterstützt.
NMDAε1 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Grin2a-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Grin2a abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Grin2a-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Grin2a-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.