NMDAε1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400963

Descripción general

GRIN2A codifica la subunidad del receptor NMDA NMDAε1 (GluN2A), un componente de un canal iónico activado por glutamato que se ensambla con otras subunidades del receptor NMDA para mediar la neurotransmisión excitatoria permeable a Ca²⁺. Esta subunidad ayuda a definir la cinética del receptor y la intensidad de la señalización sináptica, y sustenta procesos de plasticidad sináptica dependientes de la actividad, como la potenciación a largo plazo y la depresión a largo plazo. NMDAε1 participa en redes de señalización postsináptica que acoplan el flujo iónico a programas de transcripción dependientes de CaMK/CREB y a una homeostasis más amplia de los circuitos excitatorios/inhibitorios. La variación genética o la desregulación de GRIN2A se ha asociado con fenotipos del espectro de trastornos del neurodesarrollo y de epilepsia, y se ha estudiado en el contexto de la disfunción sináptica relevante para los mecanismos de enfermedad neurológica.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO NMDAε1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen GRIN2A en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del GRIN2A junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de GRIN2A tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína NMDAε1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en GRIN2A para la investigación de la señalización de NMDAε1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de GRIN2A críticos para la función de NMDAε1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de GRIN2A para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido NMDAε1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido NMDAε1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus GRIN2A. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR NMDAε1 (h) y el plásmido HDR NMDAε1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología GRIN2A para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana GRIN2A definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.