Plasmide Double Nickase (m) nm23-H2: sc-421912-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) nm23-H2 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide nm23-H2 Double Nickase (m) et le plasmide nm23-H2 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Nme2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: nm23-H2 Antibody (X-42): sc-100400
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) nm23-H2 | sc-421912-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) nm23-H2 | sc-421912-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin **Nme2** code **nm23‑H2**, une nucléoside diphosphate kinase dotée d’activités régulatrices supplémentaires dans les compartiments nucléaire et cytoplasmique, qui contribuent à l’homéostasie des nucléotides et à un contrôle étendu du métabolisme cellulaire. nm23‑H2 a été associée à la régulation transcriptionnelle, à des processus liés à l’ADN et à l’ARN, ainsi qu’à la modulation de réseaux de signalisation influençant la prolifération cellulaire, la différenciation et les réponses au stress. Par ses rôles dans le maintien des réserves de nucléotides et sa participation à des interactions protéine–protéine et avec les acides nucléiques, Nme2 peut affecter la maintenance du génome et la progression du cycle cellulaire. Une activité altérée de la famille nm23 a été associée à des phénotypes liés au cancer et à un comportement métastatique dans de nombreux systèmes expérimentaux, ce qui en fait un nœud mécanistique pertinent pour l’étude de la biologie tumorale et des voies associées.
nm23-H2 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Nme2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Nme2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Nme2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Nme2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.