nm23-H2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-416164

Übersicht

NME1-NME2 kodiert nm23-H2, eine Nukleosiddiphosphat-Kinase, die zur Aufrechterhaltung der zellulären Nukleotid-Homöostase beiträgt, indem sie die Phosphatübertragung zwischen NTPs und NDPs katalysiert. Über seine metabolische Rolle hinaus ist nm23-H2 an der Regulation der Genexpression und von Signalnetzwerken beteiligt, die mit Proliferation, Differenzierung und Stressantworten verknüpft sind; hierfür wurden Funktionen in der Nukleinsäurebindung und der transkriptionellen Kontrolle im Zellkern beschrieben. Veränderte Aktivität und Expressionsmuster von NME1/NME2 wurden in mehreren Krebskontexten mit Tumorprogression und metastatischem Verhalten in Verbindung gebracht, was es zu einem nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien zu Invasion und Zellzustandsübergängen macht. In menschlichen Zellen wird nm23-H2 außerdem im Zusammenhang mit Zytoskelett-Umbau und Motilitätswegen untersucht, die Migrationsphänotypen beeinflussen.

Das nm23-H2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des NME1-NME2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des NME1-NME2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von NME1-NME2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die nm23-H2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von NME1-NME2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der nm23-H2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf NME1-NME2-Exone abzielen, die für die nm23-H2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere NME1-NME2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom nm23-H2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom nm23-H2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des NME1-NME2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das nm23-H2 HDR-Plasmid (h) und nm23-H2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von NME1-NME2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten NME1-NME2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.