NLRC5 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-410189-ACT

NLRC5 (membro 5 da família de receptores do tipo NOD contendo domínio CARD) é um regulador citossólico da imunidade inata, mais conhecido como ativador transcricional da apresentação de antígenos por MHC de classe I. Ele coordena a expressão das cadeias pesadas de HLA de classe I, da β2-microglobulina, de TAP1/2 e de componentes do imunoproteassoma, conectando assim a sinalização inflamatória ao processamento e à apresentação de antígenos. Por meio da modulação de programas responsivos ao interferon e de vias associadas ao NF-κB, o NLRC5 influencia o reconhecimento imune, o perfil de citocinas e as respostas celulares ao estresse. A expressão desregulada de NLRC5 tem sido associada a alterações na imunogenicidade tumoral, maior suscetibilidade a infecções virais e fenótipos autoimunes, tornando-o um nó relevante para o estudo de evasão imune e defeitos na apresentação de antígenos.

NLRC5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de NLRC5 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

NLRC5 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus NLRC5 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição NLRC5, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de NLRC5. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus NLRC5 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de NLRC5 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via NLRC5 em células tumorais com expressão de NLRC5 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.