Nkx-6.3 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407505

Descripción general

NKX6-3 codifica el factor de transcripción homeobox Nkx-6.3, un regulador de unión específica al ADN implicado en programas de diferenciación epitelial y en el mantenimiento de la identidad regional en tejidos gastrointestinales. Como factor nuclear, Nkx-6.3 contribuye a configurar redes transcripcionales que controlan el compromiso de linaje, la proliferación y la maduración, interactuando con vías más amplias del desarrollo y del destino celular, que incluyen el diálogo cruzado con Wnt/β-catenina y otras cascadas de señalización asociadas a la diferenciación. La expresión alterada o la actividad reguladora de NKX6-3 se ha asociado con la disrupción de la homeostasis mucosa y se ha descrito en estudios de patología gastrointestinal, lo que respalda su relevancia en modelos de disfunción epitelial y de reprogramación transcripcional relacionada con la enfermedad.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Nkx-6.3 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen NKX6-3 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del NKX6-3 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de NKX6-3 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Nkx-6.3.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en NKX6-3 para la investigación de la señalización de Nkx-6.3, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de NKX6-3 críticos para la función de Nkx-6.3
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de NKX6-3 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Nkx-6.3 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Nkx-6.3 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus NKX6-3. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Nkx-6.3 (h) y el plásmido HDR Nkx-6.3 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología NKX6-3 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana NKX6-3 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.