Nkx-3.2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406906

Descripción general

NKX3-2 codifica el factor de transcripción homeobox Nkx-3.2, una proteína nuclear de unión al ADN que regula programas de expresión génica del desarrollo, en particular los que controlan la condrogénesis y la organización del esqueleto axial. Nkx-3.2 modula la especificación de linaje y la diferenciación al coordinar redes transcripcionales aguas abajo de la señalización por morfógenos, incluidas vías vinculadas a señales de las familias BMP y TGF-β. La alteración de la actividad de NKX3-2 se ha asociado con defectos en el desarrollo del cartílago y del esqueleto, y se estudia con frecuencia en el contexto de displasias esqueléticas congénitas y de los mecanismos de patrón craneofacial. En sistemas basados en células, NKX3-2 constituye un nodo manejable para diseccionar el control transcripcional de la diferenciación mesenquimal y la regulación de genes de la matriz extracelular.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Nkx-3.2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen NKX3-2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del NKX3-2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de NKX3-2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Nkx-3.2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en NKX3-2 para la investigación de la señalización de Nkx-3.2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de NKX3-2 críticos para la función de Nkx-3.2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de NKX3-2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Nkx-3.2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Nkx-3.2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus NKX3-2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Nkx-3.2 (h) y el plásmido HDR Nkx-3.2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología NKX3-2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana NKX3-2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.