Plasmide CRISPR/Cas9 KO Nkx-3.2 (h): sc-406906

Présentation

NKX3-2 code le facteur de transcription à homéoboîte Nkx-3.2, une protéine nucléaire se liant à l’ADN qui régule des programmes d’expression génique du développement, en particulier ceux qui contrôlent la chondrogenèse et la mise en place du squelette axial. Nkx-3.2 module la spécification de lignée et la différenciation en coordonnant des réseaux transcriptionnels en aval de la signalisation par des morphogènes, notamment des voies liées aux signaux des familles BMP et TGF-β. Une activité NKX3-2 altérée a été associée à des anomalies du développement du cartilage et du squelette et est fréquemment étudiée dans le contexte des dysplasies squelettiques congénitales et des mécanismes de mise en place du patron craniofacial. Dans des systèmes cellulaires, NKX3-2 constitue un nœud d’étude pratique pour disséquer le contrôle transcriptionnel de la différenciation mésenchymateuse et la régulation des gènes de la matrice extracellulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Nkx-3.2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène NKX3-2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du NKX3-2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert NKX3-2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Nkx-3.2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en NKX3-2 pour l'étude de la signalisation de Nkx-3.2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de NKX3-2 essentiels à la fonction de Nkx-3.2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de NKX3-2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Nkx-3.2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Nkx-3.2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus NKX3-2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Nkx-3.2 plasmide HDR (h) et le Nkx-3.2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie NKX3-2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles NKX3-2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.