Nkx-2.2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421901

Descripción general

Nkx2-2 codifica el factor de transcripción con homeobox Nkx-2.2, un regulador nuclear esencial para el patrón embrionario y la especificación de linajes en el sistema nervioso central en desarrollo y en tejidos derivados del endodermo. En el tubo neural ventral, Nkx-2.2 actúa aguas abajo de la señalización de Sonic hedgehog para establecer dominios de progenitores e impulsar programas de diferenciación, coordinando redes de regulación génica que determinan la identidad de subtipos neuronales. En el páncreas, Nkx-2.2 contribuye al desarrollo y la maduración de las células endocrinas controlando programas transcripcionales vinculados a la asignación de linajes de los islotes y a la expresión hormonal. La desregulación de circuitos transcripcionales dependientes de NKX2-2 se ha asociado con trayectorias neurodel desarrollo alteradas y con perturbaciones de la diferenciación endocrina, lo que respalda su uso como nodo mecanístico en estudios de biología del desarrollo y modelado de enfermedades.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Nkx-2.2 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Nkx2-2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Nkx2-2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Nkx2-2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Nkx-2.2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Nkx2-2 para la investigación de la señalización de Nkx-2.2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Nkx2-2 críticos para la función de Nkx-2.2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Nkx2-2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Nkx-2.2 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Nkx-2.2 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Nkx2-2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Nkx-2.2 (m) y el plásmido HDR Nkx-2.2 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Nkx2-2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Nkx2-2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.