Particules Lentivirales d'Activation (h) NKp44: sc-407295-LAC

Le gène humain **NCR2** code **NKp44 (CD336)**, un récepteur activateur exprimé de façon sélective à la surface des cellules natural killer (NK) activées, qui reconnaît divers ligands présents sur des cellules stressées, infectées ou transformées. Lors de sa liaison au ligand, NKp44 transmet le signal via l’adaptateur **DAP12 (TYROBP)**, porteur d’un motif **ITAM**, déclenchant des cascades dépendantes de **Syk/ZAP70** qui se couplent aux programmes **MAPK** et **NF-κB** afin de réguler la dégranulation et la production de cytokines. L’activité de **NCR2/NKp44** module la surveillance immunitaire innée aux interfaces muqueuses et tumorales et est fréquemment étudiée dans des travaux portant sur l’inflammation, l’infection et l’immunobiologie du cancer. Une signalisation NKp44 dérégulée et des variations de la disponibilité de ses ligands ont été associées à une altération des fonctions effectrices des cellules NK dans de multiples contextes pathologiques, ce qui étaye son utilisation comme marqueur mécanistique des états d’activation des NK.

Les particules d'activation lentivirales NKp44 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de NCR2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales NKp44 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription NCR2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de NKp44. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif NCR2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.