Plasmide CRISPR/Cas9 KO NK 2B4 (m): sc-421915

Présentation

Cd244 code pour NK 2B4 (CD244), un immunorécepteur de la famille SLAM exprimé à la surface des cellules NK (natural killer) murines et de certains sous-ensembles de lymphocytes T, qui module la cytotoxicité et la production de cytokines via des interactions avec CD48. La signalisation est médiée par des motifs ITSM cytoplasmiques qui recrutent des protéines adaptatrices telles que SAP/SH2D1A ou EAT-2, façonnant des réseaux de phosphorylation en aval qui ajustent l’équilibre entre signaux activateurs et inhibiteurs. Par ces voies, CD244 contribue à la formation de la synapse immunologique, à la reconnaissance des cellules cibles et à la régulation des réponses inflammatoires. Des altérations de la signalisation de CD244 ont été associées à une dérégulation de l’immunité antivirale et antitumorale, à l’épuisement fonctionnel des cellules NK et à un déséquilibre immunitaire dans des contextes d’inflammation chronique et dans des modèles de malignités hématologiques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO NK 2B4 (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Cd244 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Cd244, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Cd244 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine NK 2B4.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Cd244 pour l'étude de la signalisation de NK 2B4, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Cd244 essentiels à la fonction de NK 2B4
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Cd244 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le NK 2B4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le NK 2B4 plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Cd244. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le NK 2B4 plasmide HDR (m) et le NK 2B4 (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Cd244 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Cd244 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.