Plásmido Doble Nickase (m) Nir3: sc-422631-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)Nir3 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Nir3 (m) y el plásmido de doble nickasa Nir3 (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Pitpnm2. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) Nir3 | sc-422631-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) Nir3 | sc-422631-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Pitpnm2 codifica Nir3, una proteína de transferencia de fosfatidilinositol que ayuda a regular la disponibilidad de fosfoinosítidos en los sitios de contacto entre el retículo endoplásmico y la membrana plasmática. Nir3 participa en el recambio de fosfoinosítidos al favorecer la reposición de PI(4,5)P2 tras la señalización de la fosfolipasa C, influyendo así en las respuestas de receptores acoplados a Ca2+, el tráfico de membranas y la dinámica del citoesqueleto. Mediante estas funciones, Nir3 contribuye a la homeostasis de la señalización lipídica, relevante para la fisiología neuronal y para procesos más amplios que implican señalización impulsada por receptores y remodelación de membranas. El control alterado del metabolismo de los fosfoinosítidos está implicado en múltiples contextos de estrés y disfunción celular, lo que motiva estudios mecanísticos sobre la transferencia de lípidos dependiente de Nir3 y la adaptación de la señalización.
Nir3 El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Pitpnm2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Pitpnm2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Pitpnm2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Pitpnm2 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.