Nir2 Plasmide Double Nickase (m): sc-422251-NIC

Pitpnm1 codifica Nir2, una proteina di trasferimento della fosfatidilinositolo che sostiene l’omeostasi dei fosfoinositidi scambiando lipidi tra membrane e mantenendo i pool di fosfatidilinositolo 4,5-bisfosfato nella membrana plasmatica. Nelle cellule di topo, Nir2 collega la segnalazione della fosfolipasi C indotta dai recettori al rifornimento lipidico nei siti di contatto tra reticolo endoplasmatico e membrana plasmatica, influenzando la segnalazione dipendente dal calcio, il traffico di membrana e la dinamica del citoscheletro. Grazie al suo ruolo nella regolazione del turnover dei fosfoinositidi, Nir2 contribuisce a processi quali migrazione cellulare, crescita dei neuriti e trasporto vescicolare, sensibili ai flussi di segnalazione lipidica. La disregolazione del metabolismo dei fosfoinositidi e della funzione dei siti di contatto tra membrane è di ampia rilevanza per studi di neurobiologia, metabolismo e segnalazione proliferativa, offrendo punti di accesso meccanicistici per modelli di ricerca orientati alle malattie.

Nir2 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Pitpnm1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Pitpnm1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Pitpnm1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Pitpnm1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.