NIPP1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406193

Descripción general

PPP1R8 codifica el inhibidor nuclear de la proteína fosfatasa 1 (NIPP1), una subunidad reguladora multifuncional que modula la desfosforilación dependiente de PP1 dentro del núcleo. NIPP1 participa en el control de programas de transcripción, el empalme (splicing) del pre-ARNm y procesos de la cromatina ligados al ciclo celular, al coordinar la actividad fosfatasa con complejos asociados al ARN y a la cromatina. A través de estas funciones, PPP1R8 contribuye al mantenimiento de la fidelidad de la señalización nuclear y de estados reguladores del genoma que influyen en la proliferación y las respuestas al estrés. La alteración de la regulación de la señalización de PP1 y de las vías nucleares de control por fosforilación en las que participa NIPP1 se ha estudiado en contextos relevantes para la biología tumoral y otros trastornos de crecimiento y diferenciación desregulados.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO NIPP1 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen PPP1R8 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del PPP1R8 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de PPP1R8 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína NIPP1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en PPP1R8 para la investigación de la señalización de NIPP1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de PPP1R8 críticos para la función de NIPP1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de PPP1R8 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido NIPP1 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido NIPP1 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus PPP1R8. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR NIPP1 (h) y el plásmido HDR NIPP1 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología PPP1R8 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana PPP1R8 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.