Particules Lentivirales d'Activation (h) NIPBL: sc-403371-LAC

NIPBL (protéine de type Nipped-B) code un facteur de chargement de la cohésine qui coordonne la cohésion des chromatides sœurs et l’organisation de la chromatine à plus haut niveau, permettant une ségrégation chromosomique fidèle et des réponses efficaces aux dommages de l’ADN. En facilitant le dépôt de la cohésine et en stabilisant les contacts à longue distance entre enhancers et promoteurs, NIPBL influence des programmes transcriptionnels à l’échelle du génome, essentiels au développement embryonnaire et aux décisions de destinée cellulaire. La régulation dépendante de NIPBL recoupe des voies contrôlant le calendrier de réplication, l’élongation transcriptionnelle et la réparation des cassures double brin. Un dérèglement de la fonction de NIPBL est associé à des cohesinopathies telles que le syndrome de Cornelia de Lange et a été étudié dans le contexte des modifications de l’architecture de la chromatine observées dans le cancer et les troubles neurodéveloppementaux.

Les particules d'activation lentivirales NIPBL (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de NIPBL dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales NIPBL (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription NIPBL, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de NIPBL. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif NIPBL ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.