Plásmido CRISPR de Activación (h) Ninein: sc-402270-ACT

El NIN humano codifica nineína, una proteína centrosomal de tipo *coiled-coil* que se localiza en el centríolo madre y en el material pericentriolar, donde ancla los extremos menos de los microtúbulos y ayuda a organizar redes de microtúbulos no centrosomales. La nineína contribuye a la maduración del centrosoma, el ensamblaje del huso, la ciliogénesis y el mantenimiento de la polaridad celular al coordinar durante el ciclo celular la dinámica de nucleación y anclaje de microtúbulos. A través de estas funciones, NIN vincula la integridad del centrosoma con la fidelidad mitótica y la arquitectura del citoesqueleto, procesos que con frecuencia se ven alterados en trastornos proliferativos y del neurodesarrollo. La alteración de la función de nineína se ha estudiado en el contexto de defectos en la señalización ciliar, la migración celular y fenotipos de inestabilidad cromosómica relevantes para la investigación de mecanismos de enfermedad.

Ninein El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de NIN sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Ninein El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus NIN en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional NIN, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Ninein. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo NIN y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Ninein en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Ninein en células tumorales con expresión de NIN silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.