Partículas Lentivirales de Activación (m2) NIK: sc-424749-LAC-2

El gen murino Map3k14 codifica la quinasa inductora de NF-κB (NIK), una MAP3K que actúa como activador central de la vía no canónica de NF-κB al promover el procesamiento dependiente de IKKα de NF-κB2 p100 a p52 aguas abajo de receptores como BAFFR, CD40, LTβR y RANK. La señalización de NIK regula la organogénesis linfoide, la maduración y supervivencia de las células B, la diferenciación de osteoclastos y programas transcripcionales inflamatorios mediante la coordinación de la actividad de las redes MAPK y NF-κB. La actividad desregulada de Map3k14/NIK se asocia con una homeostasis inmunitaria alterada e inflamación crónica, con relevancia para fenotipos autoinmunes y la patobiología impulsada por células B en modelos experimentales. La edición génica de Map3k14 en ratón permite estudios mecanísticos de la señalización proximal al receptor, el control transcripcional y las contribuciones específicas de cada tipo celular de la señalización no canónica de NF-κB en investigación de inmunología e inflamación.

Las partículas de activación lentiviral NIK (m2) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Map3k14 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral NIK (m2) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Map3k14, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de NIK. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Map3k14 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.