Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNG Double Nickase Plasmid (h): sc-403321-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNG Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNG Double-Nickase-Plasmid (h) und Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNG Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CHRNG abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNG: sc-58597
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNG Double Nickase Plasmid (h) | sc-403321-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNG Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403321-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CHRNG kodiert die Gamma-Untereinheit des muskeltypischen nikotinischen Acetylcholinrezeptors (nAChR), eines ligandengesteuerten Ionenkanals, der die schnelle synaptische Signalübertragung an der neuromuskulären Endplatte vermittelt. Während der fetalen und perinatalen Entwicklung trägt der Gamma-haltige Rezeptor zur acetylcholinabhängigen Membrandepolarisation, zum Kationenfluss und zur Erregungs‑Kontraktions‑Kopplung bei und unterstützt so die Muskelreifung sowie die motorische Innervation. Die CHRNG-Funktion ist in cholinerge Signalwege, die Organisation der postsynaptischen Membran und aktivitätsabhängige Programme der Myofaser-Differenzierung eingebunden. Genetische Varianten oder eine Fehlregulation von CHRNG wurden mit angeborenen neuromuskulären Erkrankungen in Verbindung gebracht, die durch verminderte fetale Bewegungen und eine abnorme Ausbildung der neuromuskulären Endplatte gekennzeichnet sind, was CHRNG zu einem nützlichen Ziel für die Untersuchung der entwicklungsabhängigen Synaptogenese und der Kanalassemblierung macht.
Nicotinic Acetylcholine Receptor gamma/CHRNG Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CHRNG-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CHRNG abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CHRNG-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CHRNG-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.