Nicotinic Acetylcholine Receptor epsilon/CHRNE Double Nickase Plasmid (h): sc-404780-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Nicotinic Acetylcholine Receptor epsilon/CHRNE Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Nicotinic Acetylcholine Receptor epsilon/CHRNE Double-Nickase-Plasmid (h) und Nicotinic Acetylcholine Receptor epsilon/CHRNE Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf CHRNE abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Nicotinic Acetylcholine Receptor epsilon/CHRNE: sc-376747
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Nicotinic Acetylcholine Receptor epsilon/CHRNE Double Nickase Plasmid (h) | sc-404780-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Nicotinic Acetylcholine Receptor epsilon/CHRNE Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404780-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
CHRNE kodiert die Epsilon‑Untereinheit des muskulären nikotinischen Acetylcholinrezeptors (nAChR), eines ligandengesteuerten Kationenkanals, der für die schnelle synaptische Signalübertragung an der neuromuskulären Endplatte essenziell ist. Der Einbau der Epsilon‑Untereinheit in das adulte nAChR‑Pentamer ermöglicht die acetylcholinabhängige Kanalöffnung, den Natriumeinstrom und die Depolarisation der Endplatte, die die Erregungs‑Kontraktions‑Kopplung einleitet. Die CHRNE‑Funktion ist in die Agrin–LRP4–MuSK‑Signalgebung, die durch Acetylcholinesterase regulierte Entfernung des Neurotransmitters sowie die aktivitätsabhängige Rezeptorclusterung und den Turnover an der postsynaptischen Membran eingebunden. Pathogene CHRNE‑Varianten sind mit kongenitalen myasthenen Syndromen assoziiert, die durch eine gestörte neuromuskuläre Transmission und eine veränderte Rezeptorexpression oder Gating‑Kinetik gekennzeichnet sind.
Nicotinic Acetylcholine Receptor epsilon/CHRNE Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des CHRNE-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von CHRNE abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die CHRNE-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit CHRNE-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.