Plásmido Doble Nickase (h) Nicotinic Acetylcholine Receptor epsilon/CHRNE: sc-404780-NIC

CHRNE codifica la subunidad épsilon del receptor nicotínico de acetilcolina (nAChR) de tipo muscular, un canal catiónico activado por ligando que es esencial para la transmisión sináptica rápida en la unión neuromuscular. La incorporación de la subunidad épsilon al pentámero del nAChR adulto permite la apertura del canal dependiente de acetilcolina, la entrada de sodio y la despolarización de la placa motora que inicia el acoplamiento excitación–contracción. La función de CHRNE se integra con la señalización agrina–LRP4–MuSK, la eliminación del neurotransmisor regulada por la acetilcolinesterasa y la agrupación y recambio del receptor dependientes de la actividad en la membrana postsináptica. Las variantes patogénicas de CHRNE se asocian a síndromes miasténicos congénitos caracterizados por una transmisión neuromuscular alterada y cambios en la expresión del receptor o en la cinética de compuerta.

Nicotinic Acetylcholine Receptor epsilon/CHRNE El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus CHRNE en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de CHRNE. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de CHRNE. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con CHRNE alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.