Plásmido CRISPR de Activación (h) Nicotinic Acetylcholine Receptor epsilon/CHRNE: sc-404780-ACT

CHRNE codifica la subunidad épsilon del receptor nicotínico de acetilcolina (nAChR) de tipo muscular, un canal iónico activado por ligando que se ensambla en la membrana postsináptica de la unión neuromuscular para mediar una transmisión sináptica rápida. Tras la unión de la acetilcolina, el receptor se abre y permite la entrada de cationes, acoplando la señalización del neurotransmisor a la despolarización de la membrana y a los procesos de excitación–contracción. La expresión de CHRNE está regulada durante el desarrollo y contribuye a la composición del receptor, su localización y la cinética del canal en el músculo esquelético maduro. Las alteraciones genéticas de CHRNE y de otros componentes del nAChR se asocian con síndromes miasténicos congénitos, lo que lo convierte en un locus clave para estudiar la señalización neuromuscular, el mantenimiento de la sinapsis y las vías de ensamblaje del receptor.

Nicotinic Acetylcholine Receptor epsilon/CHRNE El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de CHRNE sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Nicotinic Acetylcholine Receptor epsilon/CHRNE El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus CHRNE en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional CHRNE, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Nicotinic Acetylcholine Receptor epsilon/CHRNE. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo CHRNE y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Nicotinic Acetylcholine Receptor epsilon/CHRNE en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Nicotinic Acetylcholine Receptor epsilon/CHRNE en células tumorales con expresión de CHRNE silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.